مكونات معمل زراعة الأنسجة النباتية Plant Tissue Culture Laboratory

تجرى زراعة الأنسجة النباتية تحت ظروف معقمة في معامل أو مختبرات خاصة تسمى (معامل أومختبرات زراعة الأنسجة) ويجب أن تتوافر فيها شروط معينة وأن تجهز تجهيزا خاصا ويجب أن يكون المعمل خالى من جميع الكائنات الدقيقة الملوثة وأن يكون بعيدا عن الأماكن والطرق المتربة والتي يمكن أن تلوث المزارع والبيئات.  إن إنشاء معمل لزراعة الأنسجة يعتمد فى الأساس على نوعية وهدف الأبحاث والدراسات التى سوف تجرى داخل المعمل وكذلك الميزانية المعدة لإنشاء هذا العمل. بغض النظر عن نوع التقنية التى سوف تستخدم داخل المعمل إن كان الهدف منها على سبيل المثال إكثار النباتات أو إنتاج المركبات الثانوية أو إجراء تجارب التحسين الوراثى ونقل الجينات  الهامة إلى النبات فلابد من توافر الركائز الأساسية للمعمل والتى تشتمل على ما يأتى:

• مكان للغسيل والتخزين.
• مكان لإعداد البيئة وتعقيمها وتخزينها.
• غرفة لإجراء عمليات التعقيم والزراعة.
• غرفة للنمو مزودة بنظام للتحكم فى الحرارة والضوء والرطوبة.
• غرفة لإجراء عملية الملاحظة على النتائج.

ونستعرض هذه المكونات كالآتى:

1- غرفة الغسيل ومخزن للأدوات  Washing and Storage Room

يجب أن تشمل غرفة الغسيل مكان متسع به أحواض ذات صرف جيد مصنعة من الرصاص  لمقاومة الأحماض والقلويات التى تستخدم داخل المعمل ومزودة بمصدر للمياه الساخنة والباردة فضلاً على وجود مناضدعمل يوضع عليها جهاز التقطير المزدوج Duble distilled water . غسالة أطباق، أحواض بلاستيكية وإستانلس لإجراء عملية النقع والشطف بها، مجفف هوائى وفرش للغسيل، يجب أن تكون الغرفة مزودة بجهاز شفط للأتربة لحماية الأدوات المغسولة من التلوث مرة أخرى.  وسوف نقدم هنا أحد الرسومات الهندسية لمعمل زراعة الأنسجة (شكل 1).

A- غرفة إعداد البيئات الغذائية والتعقيم        1- ترابيزة للمعمل             2- مكان جهاز التعقيم         3- حمام مائى             4- فرن للتعقيم الجاف

B- غرفةغسيل    1- ترابيزة معمل           2- حوض مزدوج للغسيل     3- مكان لمواد الغسيل وفرش الغسيل   4-مكان للتجفيف الهوائى مثل الأرفف   5- مكان لفرن التجفيف.                         

C– غرفة مظلمة للتصوير   1- ترابيزة للعمل         2- ثلاجة وديب فريزر           3 – حوض للغسيل.

D-غرفة لتخزين الكيماويات والزجاجات.

E– غرفة الزراعة والنقل 1-الهود وهو جهاز منقى للهواء ويستخدم للزراعة وهو مزود بجهاز أشعة فوق بنفسجية تستخدم للتعقيم.

F– غرف مزودة بنظام للتحكم فى الحرارة والإضاءة وكذلك الفترة الضوئية.    1-جهاز رج               2- أرفف للزراعة.

G– المعمل الرئيسى مزود بكل من ترابيزات معمل ومكاتب 1- مكان للميكروسكوب    2-عدة موازين ومنها مايقيس حتى (3-4 أرقام عشرية)    3- سخان ذو مقلب مغناطيسى     4- جهاز قياس الأس الأيدروجينى 5- مكان للأدوات المعملية 6- جهاز تقطير مياه مزدوج  7- مكان اتصال بين أ ، ب

H– مكان لعمليات الأقلمة والنقل خارج المعمل مزود بجهاز تحكم للحرارة والضوء والرطوبة.

وفيما يلى بعض الأدوات الموجودة فى غرفة الغسيل ومخزن للأدوات:

أ – الأدوات الزجاجية

يجب أن تكون الأدوات الزجاجية من النوع المقاوم للحرارة (بيركس) ويكون أفضل إذا كانت غير قابلة للكسر أو الخدش. الطريقة المثلى لغسيل الأدوات الزجاجية عن طريق النقع فى محلول Sodium dichromat-sulphoric acid الصوديوم داى كرومات حامض الكبريتيك لمدة 4 ساعات على الأقل ونظراً لخطورة حامض الكبريتيك على الجلد والعيون فإنه يستخدم الآن المحاليل المطهرة مثل (الكلوراكس) لمدة 16 ساعة نقع ثم تؤخذ الزجاجات وتشطف تحت ماء جارى من الصنبور ثم يعاد الشطف فى ماء مقطر. إذا كان الغسيل ميكانيكياً فى إحدى غسالات الأطباق فالأوعية الزجاجية تعامل بالمطهر على درجة 70 °م  لمدة 5 – 10 دقائق. ولمزيد من النظافة تنقع فى ماء ساخن لمدة 5 دقائق أخرى. ثم تشطف بواسطة ماء منزوع منه الأيونات المعدنية لمدة 3 دقائق ثم تشطف نهائياً بواسطة ماء مقطر.ولتجفيف الأدوات الزجاجة توضع الأوعية الزجاجية فى فرن ذات درجات حرارة عالية أو أى مجفف هوائى ساخن وفى بعض الأحيان يوجد بعض من آجار البيئة ملتصق فى بعض الأوعية فلابد من إزالته بالماء الساخن أو وضعة فى جهاز التعقيم لإجراء عملية سيولة للآجار قبل المعاملة بالمطهرات.

ب- الأدوات البلاستيكية

بدأ فى الفترة الأخيرة إستخدام العديد من الأدوات البلاستيكية فى معامل زراعة الأنسجة تكون معقمة بالأشعة من إنتاج العديد من الشركات مثل (فالكون, كورننج., نال جين ونال جية ) وهذه الأدوات تكون الاستخدام مرة واحدة فقط ثم تعدم ولكن مع إرتفاع أسعار البلاستيك ظهر الإحتياج إلى إنتاج أدوات بلاستيكية يمكن إستخدامها أكثر من مرة. هذه الأدوات يجب أن تشطف بواسطة أحد المطهرات متوسطة القوة وتنقع بعد ذلك فى الماء الساخن ثم فى الماء المقطر المعقم وتختلف الخطوات المستخدمة فى الغسيل طبقاً لنوع وإستخدام الأدوات البلاستيكية ولكن تراعى الخطوات التالية لغسيلها:

1-         تشطف بإحدى المذيبات العضوية مثل الكحول – الأسيتون – الكلورفورم ولا تستخدم هذه مع البولى أكليرك).

2-         تغلى فى محلول بيكربونات الصوديوم وهذه المعاملة لا ينصح باستخدامها مع الأدوات المصنعة من البولى إيثلين أو الأكليرك.

3-         تنقع فى محلول بيكربونات الصوديوم لمدة 4 ساعات على الأقل.

4-         تنقع بعد ذلك فى محلول حامض الأيدروكلوريك واحد عيارى لمدة 8 ساعات ثم فى محلول حامض النتريك لمدة 3 ساعات أخرى ثم تشطف بعد ذلك بواسطة ماء مقطر ثم تجفف وتحفظ بعيداً عن الأتربة.

2- غرفة إعداد البيئات الغذائيةMedia Preparation Room         

إن مكان إعداد البيئة الغذائية يجب أن يكون به الإستعدادات والفراغات اللازمة لتخزين الكيماويات و أدوات وأوعية الزراعة وكل الأدوات اللازمة لإعداد البيئة الغذائية مثل جهاز تسخين بمقلب  – ميزان حساس – دوارق – كاسات – ماصات – جهاز قياس الأس الأيدروجينى pH حمام مائى – موقد بنزن مزودة بالغاز، فرن ميكروويف – جهاز تعقيم أوتوكلاف أو حلة طهى ذات ضغط عالى أو حلل عادية لطبخ وإعداد البيئة الغذائية وهناك أجهزة ضرورية مثل الثلاجات وجهاز رج – جهاز شفط أو تفريغ وذلك لتفريغ البيئة من الهواء – جهاز تجميد.

3- غرفة الزراعة   Culture Room

يمكن إجراء تقنيات زراعة الأنسجة بنجاح فى مكان نظيف وجاف عند إتخاذ جميع الإحتياطات اللازمة لمنع دخول أى ملوثات إلى الأدوات المستخدمة فى الزراعة. إن أبسط الطرق فى معامل زراعة الأنسجة هو إستخدام صندوق بلاستيك مغلق ومطهر جيداً بواسطة إستخدام الأشعة فوق البنفسجية. على أن تطهر أرضية الصندوق باستخدام كحول إيثانول 95%  وأيضاً يمكن إستخدام صندوق خشبى أو ما يطلق عليه (الهود) وله باب أمان من البلاستيك أو الزجاج يمكن فتحه وقفله ويجب أن يكون الباب مزود بمانعة للأتربة ستارة هوائية. ولأداء العمل داخل الهود يقوم الأخصائى بإدخال يديه داخل الهود ويؤدى العمل المطلوب منه مع مراعاة تعقيم يديه بالكحول قبل إدخالها إلى مكان العمل داخل الهود وبطبيعة الحال فانة من الباب الزجاجى يمكنه  مشاهدة ما يجريه داخل الهود. ويمكن إستخدام الهود فى العمليات القليلة ولكن له سعة محدودة. وعند تقدم العمل فى زراعة الأنسجة والاحتياج إلى إجراء العديد من الأعمال داخل الهود ظهرت فى الأسواق أنواع أخرى منه. أمكن إستخدام غرفة كبيرة معقمة بواسطة الـ UV بحيث يدخلها هواء منقى من الأتربة بواسطة مجموعة من الفلاتر مثل فلتر HEPAحيث تصل كفاءته من 99.97 إلى 99 ,99% وهذه تقوم بعدم السماح للأتربة والكائنات الدقيقة بالنفاذ منه وهو يستخدم فى معظم معامل زراعة الأنسجة وهو ما يطلق عليه (الهود) Laminar airflow وهو عبارة عن جهاز مزود بواسطة موتور صغير يدفع الهواء فى أحد الفلاتر التى تحجز الأتربة العالقة الكبيرة الحجم ثم بعد ذلك يمر الهواء إلى فلتر دقيق  HEPA (ميكرون) 0.3 μ والهواء إما يدفع رأسياً أو أفقياً فى منطقة العمل (الهواء القادم من منطقة الفلاتر يكون خالياً من الأتربة والبكتريا والفطريات) وسرعته حوالى 27  ± 3م/ دقيقة وهذه السرعة قادرة على إزاحة أى مصدر للتلوث الخارجى من أوراق أو شعر أو أتربة عن منطقة العمل داخل الكابينة.

وهذا النوع من الكبائن متوفر بأسعار مختلفة وأحجام مختلفة يختار الباحث منها ما يناسب حجم العمل وسعة المكان الذى يعمل به وتيار الهواء داخل الكابينة لا يؤثر على موقد البنزين أو مصدر اللهب بها حيث السرعة المعتدلة للهواء المدفوع. وفى حالة المناطق الحارة والشبه حارة والجو الترابى ينصح باستخدام هذه الكابينة فى غرف ذات أبواب مزدوجة وذلك لإطالة عمر الفلاتر وممنوع منعاً قاطعاً أن تواجه الكابينة باب أو شباك فى الغرفة.

وكابينة زراعـة الأنسجة النباتية (الهود) تستخدم كمكان معقم لزراعة الأنسجة والأعضاء النباتية في الأوانى سواء (الزجاجية أو البلاستيكية المحتوية على البيئة المعقمة) ويجهز في الهود موقد بنزن أو موقد كحول (سبرتاية) ومشارط وملاقط معقمة وتحتوى كذلك حجرة الزراعة على تروللى وأسبتة لنقل الأوانى الزجاجية التي زرعت إلي غرفة الحضانة ويوجد بابان لغرفة الزراعة أو ستارة هوائية للإقلال بقدر الإمكان من التلوث ويـفضل الدخول في هذه الحجرة للأشخاص القائمين بالعمل فقط وذلك للإقلال من التلوث بقدر الإمكان.

وفي هذه الحجرة يوجد بعض الحوامل الرأسية التي تحتوى على بعض الأرفف أو ترابيزة وذلك لوضع الأوعية المحتوية على البيئة والأوعية المحتوية على نباتات لإكثارها وكذلك الأوعية التي تحتوى على الماء المقطر المعقم الذى يستخدم في غسيل الأجزاء النباتية بعد عملية النقع في هيبوكلوريت الصوديوم (الكلوروكس) أو كحول الإيثانول.

4- غرفة التحضين    Incubation Room                         

تؤثر العوامل البيئية كثيراً على عملية نمو المزارع وكذلك تكشفها ولذلك فإن جميع أنواع مزارع الأنسجة تحفظ فى مكان يمكن التحكم بداخله فى درجة الحرارة والضوء والرطوبة ودورة الهواء. إن مزارع البروتوبلاست أو المتوك والمزارع السائلة أكثر حاجة لظروف التحكم عن مزارع الكالوسات ولذلك يجب أن يوضع برنامج لدرجات الحرارة والإضاءة على مدار 24 ساعة.

عموماً درجة الحرارة المثلى لنمو الكالوسات والمزارع 25 ± 2ºم. أما عن درجات الإضاءة وطول الفترة الضوئية فإنها تتباين حسب النبات النامى فى الغرفة وتنظيم فترة العمل عن طريق إستخدام ساعة أو منظم ميقاتى لذلك الغرض. وأغلب النباتات تنمو فى ضوء خافت لا تزيد قوته عن واحد كيلو لوكس والبعض يحتاج الى كثافة ضوئية عالية 5الى10 كيلو لوكس  وأحياناً تتطلب بعض المزارع النمو فى إظلام تام. وعموماً فإن هذه العملية يمكن التحكم فيها من وقت لآخر حسب الغرض من البحث ونوع المزرعة النامية والنبات النامى.

أما النسبة المئوية للرطوبة داخل غرف النمو فإنها تتباين من 20 – 98% ويمكن التحكم فيها عن طريق أجهزة التحكم فى الرطوبة. وبالنسبة لأرفف النمو داخل الغرفة قد تكون من الزجاج أو من الخشب وكل رف مزود بوحدة إضاءة مستقلة عن الآخر وأحياناً توضع مروحة صغيرة على أحد جوانب الرف حتى يتم تنظيم توزيع الحرارة التى قد تنبعث عند استخدام وحدات الإضاءة ومن المفضل إستخدام وحدات إضاءة بيضاء باردة فلورسنت لا تصدر أى حرارة عند استخدامها أو أقل حرارة ممكنة من النوع Cool White وتوضع أوعية الزراعة إما مباشرة على الأرفف أو توضع فى صوانى إما بلاستيكية أو من الألومنيوم لسهولة النقل والتعامل معها داخل المعمل.

فى العادة توضع ورقة على أوعية الزراعة متضمنة بعض المعلومات الأساسية مثل نوع التجربة وتاريخ الزراعة ونوع النبات والمعاملة الغذائية التى بداخله. أحياناً تستخدم حضانات نمو كبيرة الحجم وفى داخل هذه الحضانات يمكن التحكم فيها أفضل من غرف النمو المجهزة. لابد من توفر مواصفات خاصة فى حضانات النمو. إن انقطاع التيار الكهربائى وهذا وارد قد يؤدى إلى توقف أوموت الخلايا خاصة النامية فى المزارع السائلة على أجهزة الرج ولذلك لابد من توفر مولد كهربائى إحتياطى يعمل بمجرد فصل التيار الكهربائى الأساسى عن المعمل.

قد تكون حضانات كهربائية مجهزة بالظروف البيئة المطلوبة لزراعة الأنسجة وبها أرفف تتحكم في إضاءتها ودرجة حرارتها بقدر الإمكان.  وقد تكون حجرة نظيفة معقمة بقدر الإمكان يوجد بها Stands وهي عبارة عن حوامل رأسية يوجد بها أرفف مضاءة ومزودة بجهاز لضبط الوقت Timer (لضبط فترة الإضاءة) وهي غالبا 16 ساعة إضاءة و 8 ساعات إظلام وتحتوى هذه الحجرة على أجهزة تكييف لضبط درجة الحرارة المطلوبة بقدر الإمكان وكذلك جهاز Lux meter لقياس الكثافة الضوئية كما تحتوى الحجرة أيضا على مرشحات هوائية وذلك لتجديد الهواء الداخلى للغرفة حيث أنها لايوجد بها شبابيك أو أي منافذ أخرى ماعدا باب واحد فقط لدخول وخروج النباتات والأشخاص. وال Stands عبارة عن أربعة حوامل رأسية من الألوميتال أو الحديد بطول5 و2-3 أمتار وبها من 3 – 5 أرفف بين الرف والآخر 40 – 50 سم وهي مضاءة بلمبات الفلورسنت.

 5- غرفة الملاحظة وجمع المعلومات       Observation or Data collection Area

تجرى متابعة النموات داخل الدوارق إما فى غرفة النمو داخل الحضانات على فترات متقاربة متساوية حيث إنه يجب أن تكون المتابعة فى نفس ظروف النمو ولذلك تفحص المزارع إما فى غرفة النمو أو فى الكابينة الهوائية المعقمة أو أى منطقة معقمة صالحة لتجديد ونقل المزارع بالنسبة للفحص الميكروسكوبى يمكن أن تأخذ المزارع إلى حيث يوجد الميكروسكوب. النباتات الناتجة من الكالوسات أو من مزارع الأنسجة تنقل بعد ذلك إلى أصص صغيرة تحتوى على تربة صناعية مثل البيت موس والفيرموكوليت مكونة من عدة عناصر وتوضع فى غرفة النمو ثم تنقل إلى الصوبة الزجاجية بعد ذلك مع دوام الفحص الدورى لها وتسجيل الملاحظات عن درجة الحرارة و الضوء والرطوبة.

ملحقات معمل زراعة الأنسجة النباتية

أولا:حجرة الأقلمة

وهي حجرة تتوافر فيها أكياس أو بالات البيت موس-أصص صغيرة-أسبتة بلاستيكية توضع بها الأصص الصغيرة المنزرعة-أكياس بلاستيك-ترابيزات أوبنشات لحمل الأسبتة البلاستيكية-وسيلة للرى ويـفضل أن يكون الرى بالرذاذ ويفضل أن يكون ضوء الغرفة باستخدام لمبات الفلورسنت أوتكون الإضاءة بضوء الشمس الغير مباشر.

ثانيا:الصوب بأنواعها المختلفة 

1 – الصوب البلاستيكية وهي الأكثر إستعمالا وذلك لرخص ثمنها وتستخدم لتوفير الحرارة اللازمة لتربية ونمو وحماية النباتات من البرودة وخاصة برودة فصل الشتاء.

2- الصوب الزجاجية هي أجود أنواع الصوب حيث يتم فيها التحكم في كل الظروف البيئية من درجة الحرارة-الفترة الضوئية-والكثافة الضوئية وكذلك نسبة الرطوبة.

3- الصوب الخشبية وهذه تستخدم لإنماء نباتات الظل.

4- الصوب السلكية وهذه تستخدم لحفظ الأزهار الجافة التي سوف تستخرج منها البذور.

وتعمل هذه الصوب بحيث يتحكم في ضبط ظروفها البيئية باستخدام الكمبيوتر .الغرض من هذه الصوب هو توفير الحرارة المناسبة لنمو النباتات وخاصة في فصل الشتاء حيث يكون الجو ذو درجة حرارة منخفضة وخاصة أثناء الليل حيث يزيد إنخفاض الحرارة.  لذلك فإن هذه الصوب تدفـأ ليلا باستخدام مدافئ خاصة وهذا مع النباتات التى تتأثر بانخفاض درجة الحرارة.

ثالثا: الحقل

يجب أن تكون تربة الحقل صفراء خفيفة جيدة الصرف غنية بالمادة العضوية خالية من الأملاح وكذلك خالية من الأمراض وخاصة النيماتودا وأمراض الذبول وأن يتوفر مصدر للرى تكون المياه فية خالية من الأملاح.

بعض الملاحظات الرئيسية عند الغسيل وإستعمال الزجاجات داخل معمل زراعة الأنسجة

1-         الأدوات التى تستخدم أكثر من مرة داخل معمل زراعة الأنسجة يجب أن تفرغ من البيئات الغذائية بعد الانتهاء من العمل مباشرة وتنقع فى الماء ولا يسمح أن تجف البيئات أو الأجار داخل الأوعية.

2-         يجب أن تعزل الأدوات المستخدمة فى الكيماويات مثل المطهرات والمذيبات العضوية بعيداً عن الزجاجات المستخدمة فى الزراعة.

3-         كل الأوعية التى حدث بها تلوث أو لاصقت أى من الملوثات يجب أن تعقم قبل الاستخدام مرة أخرى.

4-         يجب إزالة أى ملصقات على الزجاجات أو أى بيانات بالحبر على أوانى الزراعة قبل الغسيل عن طريق إستخدام الأسيتون أو الكحول.

5-         الآجار أو البيئة الموجودة داخل الأوعية بعد الزراعة يجب أن تجمع ويتخلص منها بسرعة من المعمل إن كان هناك ملوثات يجب أن يعقم هذا الآجار داخل الأوتوكلاف  قبل التخلص منه.

6-         الأغطية البلاستيكية يجب أن تنقع فى ماء مقطر ويحذر نقعها فى محاليل الصابون أو المطهرات الكيماوية.

7-         الأوعية الزجاجية المستخدمة فى الزراعة يجب أن تعامل بمحلول حامضى لإزالة أى نوع من البروتينات على الجدر.

8-         الأوعية الزجاجية المصنعة من السليكون يجب أن توضع منفصلة عن الأوعية الأخرى بالمعمل وغالباً ما تكون معلمة .

ما يجب مراعاته عند غسيل الأوعية الزجاجية:

1-         يجب أن تنقع الأوعية الزجاجية فى أحد المطهرات ذات تركيز 5% لمدة ساعة على الأقل.

2-         فى الغسيل الأوتوماتيكى لا توضع أى مطهرات وتبرمج الغسالات على أساس الشطف بالمياه العادية 5 مرات ثم بالماء المقطر مرة واحدة ويمكن أن تعامل الأدوات بالمحاليل المطهرة قبل وضعها فى الغسالة.

3-         الأوعية الزجاجية الكبيرة الحجم التى لا يمكن إدخالها فى الغسالة يمكن أن تغسل خارجها عن طريق شطفها بماء الصنبور من 5 إلى 6 مرات ثم بماء مقطر مرة واحدة.

4-         إذا لم تتوفر إمكانيات الغسيل الميكانيكى فإن أى طريقة باستخدام ماكينة ذات فرش مختلفة الأحجام تؤدى الغرض.

ما يجب مراعاته عند الغسيل بالأحماض:

1-         يجب أن يرتدى الشخص الذى يقوم بالغسيل قناع للوجه وكذلك قفاز..

2-         يجب أن يتم الغسيل بالأحماض ونقع الأدوات الزجاجية فى مكان مزود بآلة شفط للأبخرة.

3-         يحذر إضافة الماء إلى الحامض وعند التخفيف يضاف الحامض إلى الماء.

4-         يجب التخلص من بواقى الغسيل بالأحماض عند تحول المحلول إلى اللون الأسود.

الصفات العامة للحضانات أو غرف النمو:

1-         درجات الحرارة بها تتراوح من 2-40 ° م.

2-         التحكم فى درجة الحرارة يجب أن يكون بمقدار ± 0.5°م.

3-         يجب أن تكون ذات أمان بالنسبة للدرجة القصوى والدنيا من الحرارة

4-         يجب أن يكون بها مسجل دائم لدرجات الحرارة.

5-         أن تكون ذات قدرة على البرمجة لمدة 24ساعة بالنسبة للضوء والحرارة.

6-         تتحمل أن يوضع بها إضاءة لأكثر من 10.000 لوكس.

7-         نسبة الرطوبة بها تتراوح من 20 – 98%.

8-         نسبة الرطوبة يكون التحكم فيها بمقدار ± 3%.

9-         أن يكون بها موزع للهواء بانتظام.

10-       أن يكون السعة الحجمية بمعدل 0.7 م3  لكل 0.5 م² مساحة.

الأجهزة والأدوات التى يجب توافرها فى معمل زراعة الأنسجة

أولا- قائمة بأهم الأدوات والأجهزة التي يجب أن تتوفر في معمل أو مختبر زراعة الأنسجة:

1 –        دوارق Flasksمخروطية بأحجام100 و125 و250 مل و1 و5 لترات.

2 –        دوارق معيارية بأحجام 500 مل و 1 و 2 و 3 لترات.

3 –        مخابير مدرجة باحجام 25 و50 و100 و500 مل ولتر واحد.

4 –        ماصات مدرجة بأحجام 1 و2 و5 و10 مل.

5 –        ماصات باسـتير.

6 –        أوعية الزراعة  

أ – أنابيب إختبار Test tubes تصنع من زجاج البيركس تتحمل عمليات التعقيم ولها أغطية شفـافة تصنع من مادة Polypropylene  لتتحمل درجات الحرارة العالية مع الضغط أثناء عملية التعقيم. وهذه الأنابيب تستخدم في الزراعة في المراحل الأولى مثل زراعة المرستيمات فيزرع كل مرستيم في أنبوبة أو ينقل إليها نبات النخيل بعد تكشفة من الكالوس.

ب – زجاجيات (برطمانات) بأحجام مختلفة منها الصغير والمتوسط والكبير لها أغطية بلاستيكية شفافة تتحمل عملية التعقيم وهذه تستخدم في المرحلة الثانية (مرحلة الإكثار).

ج – ماجينتات بأغطية بلاستيك شفافة تتحمل عملية التعـقيم تستخدم في مرحلة الإكثار.

د – أطباق بترى وهي تصنع من الزجاج وهذه تعقم أو من البلاستيك وتباع معقمة وهذه لاتستعمل إلا مرة واحدة وهذه توضع بها نباتات البطاطس لحين تقسيمها أو لتفصيص نباتات الموز أثناء عملية الزراعة فى كابينة زراعة الأنسجة (الهود).

7 –        جرادل بلاستيك لنقع الزجاجيات قبل غسيلها.

8 –        ترمومتر Digital Thermometer لقياس درجات الحرارة داخل الحضانة أو غرفة الزراعة وذلك لضبط درجة الحرارة.

9 –        فرن Oven لتجفـيف الأوعية والزجاجيات وتعقيمها وعادة يتم التعـقـيم على درجة حرارة 180°م لمدة 3 ساعات ولذلك يجب أن يعمل الفرن حتى 210°م على الأقل.

10 –      سلال سلكية توضع بها أوعية البيئات الصغيرة (أنابيب إختبار ) في أثناء تعقيمها في الأوتوكلاف والزجاجيات الصغيرة أثناء تجفيفها في  الفرن.

11 –      جهاز لنزع  الأيونات من الماء Water Deionizer .و جهاز تقطير المياه و يفضل ماهو زجاجى و منه نحصل على مياة مقطرة خالية من الأملاح والرواسب.

12 –      أوعية بلاستيكية بحجمى10 و20 لتر لتخزين الماء المقطر الناتج من جهاز التقطير.

13 –      موازين Balances (موازين حساسة) أحدهما لوزن الكميات الصغيرة جدا حوالي3 أو 4 أرقام عشرية من الجرام لوزن الهرمونات والثانى رقمان عشريان لوزن الكميات الكبيرة نسبيا مثل السكروالآجار وأملاح البيئة المستخدمة.

14 –      سخان Hot plate مع قلاب مغناطيسى Magnetic stirrer لإذابة المركبات الكيميائية وإذابة الآجار.

15 –      مضخة تفريغ لتسهيل عملية التعـقيم بالترشيح.

16 –      قنينات بلاستيك بأحجام مختلفة لتخزين المحاليل سائلة أو مجمدة.

17 –      ثلاجة Refregerator لتخزين المركبات الكيماوية والمحاليل القياسية التي تحضر منها البيئات .

18 –      ديب فريزر Deep Freezer لتخزين المحاليل القياسية لفترات أطول والهرمونات وبعض الإنزيمات ولبن جوز الهند.

19 –      جهاز توليد بخار Steamer  لإذابة الآجار والبيئات.

20 –      جهاز pH meter لقياس وضبط الpH  للبيئات والمحاليل ويقرأ اللوغاريتم السالب لتركيز أيون الهيدروجين في محلول البيئة وقبل إضافة الآجار ويقرأ من مدى صفر إلي 14 pH . وهو للـبـيـئـة الســائلة 5.2 to 5.5 وللبيئة الصلبة 5.6 to 5.8.

21 –      أوتوكلاف Autoclave أو قدور طهي وهي أجهزة تعقيم با لبخار تحت ضغط تستخدم لتعقيم البيئات والماء المقطر ويكون التعقيم على درجة حرارة 121°م تحت ضغط جوى 1.2 to 1.5. كجم /سم2 أو 15 رطل/ البوصة المربعة ولمدة ثلث ساعة (20 دقيقة).  الظروف السابقة (من حرارة وضغط) فدرجة الحرارة مع الضغط تعقم البيئة وبدون غليانها ثم بعد إنتهاء فترة التعقيم يلى ذلك فتح صنبور الضغط برفق وببطئ حتى ينزل الضغط ولا يفتح فجأة فيتسبب في غليان البيئة وتطاير الأغطية وعند التأكد من نزول الضغط إلي الصفر وتركة فترة  5 -10 دقائق بعدها يبدأ في فتح غـطـاء الأوتوكلاف وإستخراج البيئـة ووضعها لتبرد لحين إستعمالها. ويجب أن يكون هناك جوانتى من الجلد أو من القماش السميك وذلك لرفع البرطمانات من الأوتوكلاف حيث تكون تلك الأوانى ساخنة ومن الأوتوكلاف ماهو رأسى ومنه ما هو أفقى.

22 –      أغشية مرشحات تعقيم ومواسكها لتعقيم المحاليل بالترشيح (مرشحات بكتيرية).

23 –      حقن بلاستيكيـة معقمـة لغرض الإستعمال مع المحاليل المعـقمة بالترشيح.

24 –      عربات صغيرة (تروللى) مزودة بصوان مناسبة لنقل البيئات والأدوات من حجرة البيئة إلي حجرة الزراعة ونقل الأوعية التي زرعت ومن حجرة الزراعة إلي حجرة التحضين.

25 –      لمبة (شعلة) كحول أو مصباح بنزن لتعقيم الأدوات وذلك بغمس الأدوات في الكحول ثم تعريضها للهب لتشتعل ويجب أن يكون العمل في مجال الشعلة لأنها تعقم المجال الذى حولها.

26-       رشاشات صغيرة  لرش الكحول المخفف 70% داخل الهود أو حجرة العزل وكذلك تعـقـيم القـائم بالعمل.  وكذلك تعقم بها البرطمانات من الخارج قبل الإستخدام وأيضا تستخدم لرى النباتات الصغيرة بالماء (رذاذ) أثناء عملية الأقلمة.

27-       ملاقط Forceps كبيرة من الصلب الذى لايصدأ ذات أطراف غيرحادة لزراعة الأجزاء الكبيرة في الأوعية الكبيرة.

28-       ملاقط Forceps من الصلب  ذات أطراف حادة لنزع بشرة الأوراق.

29 –      ملاقط Forceps صغيرة لزراعة الأجزاء الصغيرة في الأوعية الصغيرة.

30 –      إبر Needels دقيقة للتشريح.

31 –      مشارط Scalpels حادة لتقطيع الأنسجة النباتية ومنها رقم 10 – 11 – 12 – 13.

32 –      مجهر ثنائى العينين Binocular  لرؤية الأجزاء مجهرية الحجم وكذلك يستخدم في فصل المرستيمات.

33 –      مكيفات هواء Air Condition للمحافظة على درجة الحرارة المطلوبة بقدر الإمكان في حجرة الزارعة وحجرة التحضين لأن هذا يساعد على نمو النباتات نموا جيدا داخل الأوعية في حجرة التحضين.

34 –      هزاز Shaker لهز وتحريك (بحركة منتظمة) المزارع السائلة وكذلك مزارع الكالس فيسبب التهوية وتخلل الهواء بين جميع الأنسجة المنزرعة وكذلك يجعل البيئة السائلة تلامس كل أجزاء النسيج المنزرع.

35 –      جهاز طرد مركزى Centerfuge صغير لترسيب الخلايا بغرض تحديد حجم النمو الخلوى.

36 –      شرائح ميكروسكوبيه (هيموسيتوميتر) لعد الخلايا و البروتوبلاست فى وحدة المساحة.

37 –      مجهر لفحص الخلايا والأنسجة (ميكروسكوب ضوئى) Lightmicroscope .

38 –      كابينة زراعة الأنسجة النباتية (اللامينار أو الهود) Laminar airflow hood  وهو متعدد الأنواع فمنه لعمل فرد واحد فقط فيكون طوله حوالي المتر وآخر لعمل فردين ويكون طولة حوالي 160 سم ومنة الصغير جدا وهذا يعمل لتخليص الهواء الداخل إلي حيز الكابينة من الأتربة والكائنات الدقيقة عن طريق إمراره على فلاتر  (مرشحات) ميكروبية وعليها يتوقف كفاءة الهود.  فاذا حدث تلوث بسبب الهود بعد تعقيمة تماما وخبرة القائم على العمل فتكون كفاءتة منخفضة بسبب أن هذه الفلاتر تكون كفاءتها منخفضة وهذا لمرور وقت طويل عليها دون أن تـتـغير ولهذا يجب أن تتغير من وقت إلى آخرحتى تظل كفاءتها عالية وقد يزود بلمبة أشعة فوق البنفسجية Ultra violet lamp لتعقيم الهود والجو المحيط (تؤين الجو المحيط بالهود) وبه لمبات فلورسنت وذلك لإضاءة الهود وقد يكون به مصدر لدخول الغاز الطبيعى (البوتاجاز) وذلك بتوصيله بأنبوبة غاز وقد يستخدم سبرتاية أو أي مصدر آخر لتعقيم أدوات العمل من مشارط وملاقط وخلافة.

39 –      جهاز لصب البيئة بالكميات المطلوبة بكميات متساوية.

40 –      الكيماويات الجاهزة (الكتس) مثل الخاصة بإختبار ELISA test لإختبار الفيروس.

41 –      جهاز Reader لقراءة الكتس و الميكروبليت Microplate.

42 –      المجفف وهو إناء زجاجى متين ذو غطاء زجاجى متين يحتوى على كلوريد الكالسيوم لإمتصاص الرطوبة بحيث يجعل داخل الإناء جاف وتوضع به الهرمونات والفيتامينات والمواد الهامة التي يخشى من تميؤها ويوضع داخل الديب فريزر.

43 –      حضانة Incubator مزودة بضابط لدرجة الحرارة وتعمل من 4 – 40°م ومزودة بوحدة إضاءة مع Timer لضبط فترات الإضاءة والإظلام وتتراوح شدة الإضاءة بها من 1000 إلي 10000 لوكس.

44 –      حوامل الأنابيب Raks وهي تصنع من الخشب أو الألمنيوم أو البلاستيك وهي ذات ثقوب مختلفة تبعا لسمك الأنابيب وعادة تحمل من 12 أو 24 أو 36 أنبوبة.

45 –      حمام مائى Water bath عبارة عن إناء من الصلب الذى لايصدأ ويوضع به الماء ويتم التسخين بواسطة الكهرباء ويستخدم لتسخين وغليان المواد التي لايراد تعرضها للهب النار مباشرة.

46 –      قفازات Gloves أحيانا تستعمل القفازات لمنع التلوث عن طريق اليدين أو لحماية بشرة اليدين من الكيماويات المستعملة في التطهير مثل الكحول الذى قد يسبب جفافها وكذلك من بعض المطهرات وتصنع هذه القفازات من البلاستيك الطرى المقاوم للكيماويات.

47 –      غطاء الرأس Over head  حتى لاتسقط شعيرات من رأس القائم بالعمل.

48 –      غطاء الفم Mask وذلك حتى لاتتاثر الأوعية المحتوية على البيئة المعقمة بعملية الشهيق والزفير أثناء عملية الزراعة وخاصة في حالة الإصابة بالإنفلوانزا.

49 –      غطاء الحذاء Over shoes وهو من البلاستيك لارتدائة على الحذاء حتى لاتتأثر أرضية المعمل بما تحملة الأحذية من ملوثات ويجب أن يكون هناك حذاء مخصص للمعمل.

50 –      مقياس لشدة الإضاءة  Lux meter وهو جهاز يقيس شدة الإضاءة وبهذا يمكن ضبط الإضاءة المطلوبة وهذا يستعمل في غرف النمو والحضانات.

51 –      الكيماويات Chemicals. وهي الكيماويات التي تستخدم وتساعد في تحضير البيئة وفى التعقيم.

52 –      ستارة هوائية وهذه تركب على باب غرفة الزراعة لتمنع دخول الهواء من الخارج إلي الداخل عند فتح باب الغرفة.

53 –      ورق ترشيح Filter papers وذلك لترشيح المحاليل التي تحتوى على رواسب.

توزيع الأجهزة على الغرف المختلفة للمعمل

أ-غرفة إعداد البيئات Media preparation

1- مصدر للماء والغاز والكهرباء.

2- جهاز شفط وتفريغ للغازات.

3- سخان مائى أو مصدر حرارى للتسخين.

4- سخان كهربائى من ذوات المقلب المغناطيسى.

5- زجاجيات أو أوعية جديدة غير قابلة للصدأ لإعداد البيئة وإذابتها.

6- جهاز تعقيم (أوتوكلاف) أو معقم بخار مضغوط.

7- جهاز لقياس الأس الأيدروجينىpH .

8- ميزان حساس (مليجرام).

9- أدوات زجاجية (مخبار مدرج – دوارق – كاسات – ماصات) مختلفة الأحجام وأنابيب اختبار- أطباق بترى

10- أنابيب للزراعة أو زجاجات للزراعة ذات فوهات مناسبة وأغطية مناسبة من القطن أو المطاط أو ورق الألومنيوم، البلاستيك.

11- أدوات للنقل والتشريح والتقطيع مثل مقصات – مشارط – ملاقط – إبر تشريح وخلافه.

12- فرن هوائى ذو درجة حرارة عالية لإذابة الآجار وقد يستخدام ميكرو ويف.

13- جهاز لنزع الأيونات من الماء وكذلك جهاز تقطيرماء مزدوج.

14- جهاز ترشيح وكذلك أغشية للترشيح والتعقيم عن طريق الترشيح  .

15- الكيماويات اللازمة للبيئات الغذائية سواء على صورة جافة أو مخاليط جاهزة بما فيها منظمات النمو.

16- منظفات ومطهرات.

17- وعاء لغسل الماصات (مقاوم للأحماض).

18- أرفف للتجفيف وتصفية المياه من الأدوات.

19- أماكن لتخزين الأدوات الزجاجية، الكيماويات، الماء المعقم وأشياء أخرى.

ب- أدوات لابد من توافرها أثناء عملية الزراعة والتجديد

1- كابينة زراعة الأنسجة وهذة تكون معقمة.

2- مصدر للهب مثل موقد بنزن.

3- ميكروسكوب.

4- كحول 95% للتطهير والتعقيم.

5- أطباق زجاجية معقمة لاستخدامها عند القطع للأجزاء المعقمة.

6- محاليل مطهرة للأجزاء النباتية مثل محلول الهيدروكلوريد.

ج- أدوات رئيسية لابد من توافرها فى المعمل General equipment

1- ثلاجة عادية وكذلك جهاز تجميد.

2- غسالة أطباق أوتوماتيكية.

3- جهاز موزع للأبخرة المائية والرطوبة.

4- أساسيات معملية مثل – ترولى – أطباق بلاستيكية – وصوانى معدنية.

5- حوض مجهز لاستعماله فى الغسيل بالأحماض والقلويات.

6- ميكروسكوب بسيط أو مركب.

7- أقلام للكتابة على الزجاج وأدوات ورقية لتسجيل النباتات عليها وبارافيلم لإحكام قفل الزجاجيات وخاصة عند نقلها من مكان إلى آخر أو فى حالة عرضها فى معرض.

د- أجهزة بغرفة النمو: Growth room

1- تتمتع بدرجة حرارة يمكن التحكم فيها ما بين 17 – 27° م.

2- مصدر كهربائى آخر بديل وذلك للإضاءة والحرارة.

3- أرفف لوضع الدوارق والزجاجيات المنزرع بداخلها الأنسجة.

4- لمبات فلورسنت للإضاءة.

5- منظم للوقت للتحكم فى ساعات الإضاءة.

6- جهاز رج.

7- منضدة لإجراء عملية الملاحظة وفحص المزارع.

8- أرفف لوضع المزارع السائلة عليها.

بالإضافة إلى ذلك مكان لإجراء عملية النقل والأقلمة للنباتات الناتجة من زراعة الأنسجة ويمكن التحكم فيه بالحرارة والإضاءة والرطوبة على صورة صوب زجاجية أو غرف صغيرة.